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      掌握微生物實驗細菌的單染色法的研究

      發布時間:

      2022-11-16

      作者:

      國內細菌微生物培養基生產企業


      細菌的單染色法的研究
       
      一、基本原理
      所謂單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法.此法操作簡便,適用于菌體一般形態的觀察.
      在中性、堿性或弱酸性溶液中,細菌細胞通常帶負電荷,所以常用堿性染料進行染色.堿性染料并不是堿,和其他染料一樣是一種鹽,電離時染料離子帶正電,易與帶負電荷的細菌結合而使細菌著色.例如,美藍(亞甲藍)實際上是氯化亞甲藍鹽(methylenebluechloride,縮寫為MBC),它可被電離成正、負離子
      MBC→methylene blue++chloride-
      帶正電荷的染料離子可使細菌細胞染成藍色.常用的堿性染料除美藍外,還有結晶紫(crystal violet)、堿性復紅(basicfu-chsin)、番紅(又稱沙黃,safranine)等.
      細菌體積小,較透明,如未經染色常不易識別,而經著色后,與背景形成鮮明的對比,使易于在顯微鏡下進行觀察.
       
      二、實驗器材
      顯微鏡,酒精燈,載玻片,接種環,雙層瓶,擦鏡紙,生理鹽水;
      呂氏堿性美藍染色液,石炭酸復紅染色液;
      金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌.
       
      三、實驗操作步驟
      步驟1:涂片 取兩塊干凈的載玻片,各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央,用無菌操作,分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中(每一種菌制一片),調勻并涂成薄膜.注意滴生理鹽水時不宜過多,涂片必須均勻.
      步驟2.干燥 于室溫中自然干燥.
      步驟3.固定 涂片面向上,于火焰上通過2至3次,使細胞質凝固,以固定細菌的形態,并使其不易脫落.但不能在火焰上烤,否則細菌形態將毀壞.
      步驟4.染色 放標本于水平位置,滴加染色液于涂片薄膜上,染色時間長短隨不同染色液而定.呂氏堿性美藍染色液約染2至3分鐘,石炭酸復紅染色液約染1至2分鐘.
      步驟5.水洗 染色時間到后,用自來水沖洗,直至沖下之水無色時為止.注意沖洗水流不宜過急,過大,水由玻片上端流下,避免直接沖在涂片處.沖洗后,將標本晾干或用吹風機吹干,待完全干燥后才可置油鏡下觀察.
      步驟6.鏡檢:進行顯微鏡觀察.
       
      金黃色葡萄球菌增菌培養基:胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)
       
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