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      化妝品微生物標準檢驗方法細菌總數測定

      發布時間:

      2022-11-16

      作者:

      一次性成品培養基日水生物


      化妝品微生物標準檢驗方法細菌總數測定
      Standard methods of microbiological examination for cosmetics Standard plate count
       
      細菌總數系指1克或1毫升化妝品中所含的活菌數量.測定細菌總數可用來判明化妝品被細菌污染的程度,以及生產單位所用的原料、工具設備、工藝流程、操作者的衛生狀況,是對化妝品進行衛生學評價的綜合依據
       
      本標準采用標準平板計數法
      方法提要
      化妝品中污染的細菌種類不同,每種細菌都有它-定的生理特性,培養時對營養要求,培養溫度、培養時間、pH值、帶氧性質等均有所不同.在實際工作中,不可能做到滿足所有菌的要求,因此所測定的結果,只包括在本方法所使用的條件下(在卵磷脂、吐溫80營養瓊脂上,于37C培養48h)生長的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧的細菌總數
       
       
      生理鹽水:見克B7918.1-87《化妝品微生物標準檢驗方法總則》
       
      卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂培養基
      成分:蛋白胨20克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15克,卵磷脂1克,吐溫807克,蒸餾水1000毫升
      制法:先將卵磷脂加到少量蒸餾水中,加熱溶解,加入吐溫80將其他成分(除瓊脂外)加到其余的蒸餾水中,溶解.加入已溶解的卵磷脂、吐溫80,混勻,調pH值為7.1~7.4,加入瓊脂,121C(151b)20分鐘高壓滅菌,儲存于冷暗處備用
       
      儀器
      錐形燒瓶,量簡
      pH計或精密pH試紙,高壓消毒鍋,試管,滅菌平皿:直徑9cm,滅菌刻度吸管:10毫升、2毫升、1毫升,酒精燈,恒溫培養箱,放大鏡
       
      操作步驟
      用滅菌吸管吸取1:10稀釋的檢樣2毫升,分別注入到兩個滅菌平皿內,每皿1毫升.另取1毫升注入.到9毫升滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面),更換一支吸管,并充分混勻,使成1:100稀釋液.吸取2毫升,分別注入到兩個滅菌平皿內,每皿1毫升.如樣品含菌量高,還可再稀釋成1;1000,1;10000,.....等,每種稀釋度應換1支吸管
       
      將熔化并冷至45~50C的卵磷脂、吐溫80、營養瓊脂培養基傾注平皿內,每皿約15毫升,另傾注一個不加樣品的滅菌空平皿,作空白對照.隨即轉動平皿,使樣品與培養基充分混合均勻,待瓊脂凝固后,翻轉平皿,置37攝氏度培養箱內培養48h營養瓊脂平板的圖片
       
      菌落計數方法
      先用肉眼觀察,點數菌落數,然后再用放大5~10倍的放大鏡檢查,以防遺漏.記下各平皿的菌落數后.求出同-稀釋度各平皿生長的平均菌落數.若平皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時,該平皿不宜計數.若片狀菌落不到平皿中的--半,而其余一半中菌落數分布又很均勻,則可將此半個平皿菌落計數后乘2,以代表全皿菌落數
       
      菌落計數及報告方法
      首先選取平均菌落數在30~300之間的平皿,作為菌落總數測定的范圍.當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時,即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數
      若有兩個稀釋度,其平均菌落數均在30~300個之間,則應求出兩者菌落總數之比值來決定.若其比值小于或等于2,應報告其平均數,若大于2則報告其中較小的菌落數
      若所有稀釋度的平均菌落數均大于300個,則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之
      若所有稀釋度的平均菌落數均少于30個,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之
      若所有稀釋度的平均菌落數均不在30~300個之間,其中一個稀釋度大于300個,而相鄰的另一稀釋度小于30個時,則以接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之
      若所有的稀釋度均無菌生長,報告數為每克或每毫升小于10個
      菌落計數的報告,菌落數在10以內時,按實有數值報告之,大于100時,采用二位有效數字,在二位有效數字后面的數值,應以四舍五入法計算.為了縮短數字后面零的個數,可用10的指數來表示.在報告菌落數為“不可計”時,應注明樣品的稀釋度
       
      附加說明:
      本標準由中國預防醫學科學院環境衛生監測所歸口
      本標準由“化妝品微生物標準檢驗方法”起草小組起草
      本標準主要起草人周淑玉
      本標準由中國預防醫學科學院環境衛生監測所負責解釋
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