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      藥典培訓問答七

      發布時間:

      2022-12-24

      作者:

      全國地名中國培養基生產企業


      藥典培訓問答七

      問:計數方法的驗證:執行新版藥典是否就延長培養時間做方法驗證?
      答:是。
       
      問:平皿法中提到“每個稀釋級每種培養基至少檢驗2ml供試液”,是每皿注2ml還是每皿注1ml?如要做0.5ml或0.2ml,本級是否還需做1ml?
      答:常規平皿法時每皿注1ml,做2個皿;培養基稀釋法 (即每皿0.5ml或0.2ml)時,供試液總量也應是2ml,每1ml菌落數合計后,2ml的菌落數再平均;本級就不需做1ml了,但下一級就只做1ml/皿就行了。
      日水生物培養皿圖片
      問:在細菌霉菌計數檢查中,老師提到的每個稀釋級每種培養基至少檢驗2ml供試液,但2010版藥典上并沒有要求要這樣做,那應以哪個做法為準?
      答:藥典中對平皿法的描述:平皿法“取供試液1ml,置直徑90mm 的無菌平皿中,注入15~20ml 溫度不超過45℃的溶化的營養瓊脂培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養基,混勻,凝固,倒置培養。每稀釋級每種培養基至少制備2 個平板。”這里的描述是以常規平皿法進行描述的,所以“每稀釋級每種培養基至少制備2 個平板”,也就是2ml的量。對于培養基稀釋法,請看藥典供試液的制備中3. (6) ①。
       
      問:10版藥典要求檢查沙門菌的供試品,其檢驗量應增加20g或20ml, (其中10g或10ml用于陽性對照試驗)是否指20g或20ml樣品中10g或10ml直接用于沙門菌控制檢查,另10g或10ml加pH7.0的緩沖液100ml作為1:10的供試品溶液作為細菌,霉菌,酵母菌的檢驗嗎?還是指20g都用于沙門菌檢查?
      答:20g都是用于沙門菌檢查。沙門菌的檢查法是:取3份200ml營養肉湯,其中2份分別加入10g或10ml樣品,取其中1份加入10~100cfu菌液作陽性對照。第3份加入10ml稀釋劑作陰性對照進行檢查,所以。細菌,霉菌,酵母菌檢驗的樣品不包括在這里。
       
      問:沙門菌檢查為10g或10ml,為何一次檢查量又為20g或20ml? (P130)
      答:其中10g (或10ml)是檢驗用的,另10g (或10ml)是用于陽性對照試驗的。請看上一題目解釋。
       
      問:采用薄膜過濾法時,濾膜采用何種方法滅菌最好?
      答:據我們經驗,最好采用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器,則濾膜用濕熱滅菌比較好,因為干熱滅菌后,濾膜較脆,試驗時不容易保證濾膜完整。
       
      問:方法學驗證時,采用平皿法稀釋級計數,是否要做稀釋級對照組?
      答:稀釋級對照組?是指本底菌組嗎?如果是,那就要。因為要平行試驗,才能知道同一稀釋級的本底菌是多少。如果是指稀釋劑對照組,就不用,因為所用的稀釋劑是藥典規定的,是無毒性的稀釋劑。
       
      問:方法驗證的培養基稀釋法驗證 (樣品0.2ml)只做2個平皿,每個平皿的加菌量是多少?如果同步加0.2ml菌,其加菌量就達不到50~100cfu。
      答:不管每皿加的供試液的量是多少,每皿加菌液的量都是1ml ,即都是50~100cfu。
       
      問:平皿法 (稀釋法)計數驗證時,取最低稀釋供試液如0.5毫升和50~100cfu試驗菌,那50~100cfu的試驗菌是指50~100cfu還是50~100cfu∕0.5毫升?我們是要加1毫升還是0.5毫升的試驗菌?
      答:平皿法 (稀釋法)計數驗證時,每皿要加的菌液是50~100cfu,一般我們配制的菌液濃度是50~100cfu/毫升,所以就加1毫升。如果你配制的菌液不是這個濃度,你可以折算,只要加的菌數是50~100cfu/皿就行了。
      日水干粉培養基圖片
      問:細菌霉菌方法驗證,同時做1毫升,0.5毫升,0.2毫升供試品組及供試品驗證組時,菌液是否也按1毫升,0.5毫升,0.2毫升分別加入?此時1毫升,0.5毫升,0.2毫升供試品驗證組中的菌數能否也達到50~100cfu?
      答:驗證時,不論是1毫升,0.5毫升,0.2毫升的供試液,每皿的加菌量都是50~100cfu,即1毫升 (如果你配制的菌液濃度是50~100cfu/毫升)。
       
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