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      微生物控制菌檢查:梭菌

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      控制菌檢查:梭菌

      1.供試液的制備和增菌培養
      取供試品,按照“非無菌產品微生物限度檢查制成1:10供試液”.取相當于1g或1ml供試品的供試液2份,其中1份置80℃保溫10分鐘后迅速冷卻.
      2.增菌,選擇和分離培養
      將上述2份供試液分別接種至適宜體積(經方法適用性試驗確定)的梭菌增菌培養基中,置厭氧條件下30-35℃培養48小時,取上述每一培養物少量,分別涂抹接種于哥倫比亞血瓊脂平板上,置厭氧條件下30-35℃培養48-72小時.
      3.過氧化氫酶試驗
      取上述平板上生長的菌落,置潔凈玻片上,滴加3%過氧化氫試液,若菌落表面有氣泡產生,為過氧化氫酶陽性,否則為陰性.
      4.結果判斷
      若哥倫比亞瓊脂培養基平板上有厭氧桿菌生長(有或無芽孢),且過氧化氫酶反應陰性,應進一步進行適宜的鑒定試驗,確證是否為梭菌,如果哥倫比亞瓊脂培養基平板上沒有厭氧桿菌生長,或過氧化酶反應陽性,判供試品未檢出梭菌.
      5涉及培養基
      5.1梭菌增菌培養基
       
      Peptone(胨)10.0g
      BeefExtract(牛肉浸出粉)10.0g
      YeastExtract(酵母浸出粉)3.0g
      SolubleStarch(可溶性淀粉)1.0g
      (鹽酸半胱氨酸)0.5g
      SodiumChloride(氯化鈉)5.0g
      SodiumAcetate(乙酸鈉)3.0g
      Dextrose(葡萄糖)5.0g
      Agar(瓊脂)0.5g
      pH6.8±0.2(25℃)
      5.2哥倫比亞瓊脂培養基
      哥倫比亞瓊脂培養基圖片
      (胰酪胨)10.0g
      (氯化鈉)5.0g
      (酵母浸出粉)5.0g
      (心胰酶水解物)3.0g
      (玉米淀粉)1.0g
      (瓊脂)15.0g
      pH7.3±0.2(25℃)
      稱取本品44.0g于1L蒸餾水或去離子水中(可按比例增加或減少配制量),加熱煮沸至完全溶解,分裝,121℃高壓滅菌15分鐘.如有必要,冷卻至45-50℃,每100ml培養基中添加1支20102(硫酸慶大霉素),搖勻,備用.
      5.3硫酸慶大霉素
      該品為氨基糖甙類廣譜抗生素,對多種革蘭陰性菌及陽性菌都具有抑菌和殺菌作用.對綠膿桿菌,產氣桿菌,肺炎桿菌,沙門氏菌屬,大腸桿菌及變形桿菌等革蘭陰性菌和金葡菌等作用較強.
      6梭菌
      芽孢桿菌科的1屬.是能形成芽孢,厭氧生長的革蘭氏染色陽性大桿菌.一般為專性厭氧,多數借周生鞭毛運動.因其芽孢直徑較大,常使細胞中間膨大呈梭狀,故名.細胞大小約0.3μm×1.9μm-2μm×10μm.不能還原硫酸鹽.多數過氧化氫酶陰性.化能異養,營養要求較高,肉渣培養基中生長混濁,部分肉渣消化并產生氣體.廣泛地分布于土壤,污泥,人和動物的腸道等處.
      常見致病菌:如破傷風梭菌(C.tetani),產氣莢膜梭菌(C.perfringens)和肉毒梭菌(C.botulinum)等,產氣莢膜羧菌是人類氣性壞疽的主要病原菌.1892年,美國病理學家W.H.韋爾奇等自一尸體分出本菌,因而又稱韋氏梭菌.菌體較大,大小為(0.9-1.3)×(3.0-9.0)微米,無鞭毛,有莢膜.芽孢橢圓形,位于偏端.專性厭氧.菌落直徑2-5毫米,血瓊脂平板上有溶血圈.糖發酵能力強,產酸產氣.本菌的特征之一是在牛乳培養基中呈暴烈發酵現象.形成的毒性物質有12種,可損傷細胞膜,血管內皮細胞并使糖類分解,導致細胞壞死,組織水腫,充氣等病變.
       
      來自:青島日水培養基
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