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      GB4789.2-2010食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      GB4789.2-2010食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定
       
      食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定
       
      Nationalfoodsafetystandard
      Foodmicrobiologicalexamination:Aerobicplatecount
       
      本標準代替GB/T4789.2-2008《食品衛生微生物學檢驗菌落總數測定》.
       
      本標準與GB/T4789.2-2008相比,主要修改如下:
       
      修改了標準的中英文名稱;
      修改了菌落總數計算公式中的解釋;
      修改了培養基和試劑; 
       
      本標準的附錄A是規范性附錄.
      本標準所代替標準的歷次版本發布情況為:
      GB4789.2-1984、GB4789.2-1994、GB/T4789.2-2003、GB/T4789.2-2008.
       
      食品安全國家標準
       
      食品微生物學檢驗菌落總數測定
       
      范圍
       
      本標準規定了食品中菌落總數(Aerobicplatecount)的測定方法.
       
      本標準適用于食品中菌落總數的測定.
       
      術語和定義
       
      菌落總數aerobicplatecount
       
      食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時間等)培養后,所得每g(毫升)檢樣中形成的微生物菌落總數.
       
      設備和材料
       
      除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
       
      恒溫培養箱:36攝氏度±1攝氏度,30攝氏度±1攝氏度
      冰箱:2攝氏度至5攝氏度
      恒溫水浴箱:46±1攝氏度
      天平:感量為0.1g
      均質器
      振蕩器
       
      無菌吸管:1毫升(具0.01毫升刻度)、10毫升(具0.1毫升刻度)或微量移液器及吸頭.
      無菌錐形瓶:容量250毫升、500毫升.
      無菌培養皿:直徑90毫米.
      pH計或pH比色管或精密pH試紙.
      放大鏡或/和菌落計數器.
       
      培養基和試劑
       
      平板計數瓊脂培養基:見附錄A中A.1.
      磷酸鹽緩沖液:見附錄A中A.2.
      無菌生理鹽水:見附錄A中A.3
       
      檢驗程序
       
      菌落總數的檢驗程序見圖1
      圖一 菌落總數的檢驗程序圖片
       
      操作步驟
       
      樣品的稀釋
       
      固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內,8000r/分鐘至10000r/分鐘均質1分鐘至2分鐘,或放入盛有225毫升稀釋液的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1分鐘至2分鐘,制成1:10的樣品勻液.
       
      液體樣品:以無菌吸管吸取25毫升樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1:10的樣品勻液.
       
      用1毫升無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1毫升,沿管壁緩慢注于盛有9毫升稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1:100的樣品勻液.
       
      按6.1.3操作程序,制備10倍系列稀釋樣品勻液.每遞增稀釋一次,換用1次1毫升無菌吸管或吸頭.
       
      根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個至3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1毫升樣品勻液于無菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿.同時,分別吸取1毫升空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照.
       
      及時將15毫升至20毫升冷卻到46攝氏度的平板計數瓊脂培養基(可放置于46±1攝氏度恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻.
       
      培養
       
      待瓊脂凝固后,將平板翻轉,36±1攝氏度培養48h±2h.水產品30±1攝氏度培養72h±3h.
       
      如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4毫升),凝固后翻轉平板,按6.2.1條件進行培養.
       
      菌落計數
       
      可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量.菌落計數以菌落形成單位(colony-for分鐘gunits,CFU)表示.
       
      選取菌落數在30CFU至300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數.低于30CFU的平板記錄具體菌落數,大于300CFU的可記錄為多不可計.每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數.
       
      其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計算半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數.
       
      當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數.
       
      結果與報告
       
      菌落總數的計算方法
       
      若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(毫升)樣品中菌落總數結果.
       
      若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按公式(1)計算:
       
      計算公式圖片一
       
      式中:
       
      N:樣品中菌落數;
       
      ∑C:平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;
       
      n1:第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;
       
      n2:第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;
       
      d:稀釋因子(第一稀釋度).
       
      公式圖片二
       
      若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以相應稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度的平板菌落數均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU至300CFU之間,其中一部分小于30CFU或大于300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算.
       
      菌落總數的報告
       
      菌落數小于100CFU時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告.
       
      菌落數大于或等于100CFU時,第3位數字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數字.
       
      若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延.
       
      若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效.
       
      稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/毫升為單位報告.
       
      附錄A
       
      (規范性附錄)
       
      培養基和試劑
       
      平板計數瓊脂(platecountagar,PCA)培養基成分
       
      胰蛋白胨5.0g,酵母浸膏2.5g,葡萄糖1.0g,瓊脂15.0g,蒸餾水1000毫升,pH7.0±0.2
       
      制法
       
      將上述成分加于蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH.分裝試管或錐形瓶,121攝氏度高壓滅菌15分鐘.
       
      磷酸鹽緩沖液
       
      成分
       
      磷酸二氫鉀(KH2PO4)34.0g,蒸餾水500毫升,pH7.2
       
      制法
       
      貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500毫升蒸餾水中,用大約175毫升的1mol/L氫氧化鈉溶液調節pH,用蒸餾水稀釋到1000毫升后貯存于冰箱.
       
      稀釋液:取貯存液1.25毫升,用蒸餾水稀釋至1000毫升,分裝于適宜容器中,121攝氏度高壓滅菌15分鐘.
       
      無菌生理鹽水
       
      成分
       
      氯化鈉8.5g,蒸餾水1000毫升
       
      制法
       
      稱取8.5g氯化鈉溶于1000毫升蒸餾水中,121攝氏度高壓滅菌15分鐘.
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