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      中國藥典2015版沙門氏菌的檢測

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      中國藥典2015版沙門氏菌的檢測

      供試液制備和增菌培養
      取10克或10毫升供試品直接或處理后接種至適宜體積(經方法適用性試驗確定)的胰酪大豆胨液體培養基中,混勻,30至35攝氏度培養18至24小時.(目的:樣品中沙門氏菌的復壯與增菌)
       
      選擇和分離培養基
      取上述培養物0.1毫升接種至10毫升RV沙門增菌液體培養基中,30至35攝氏度培養18至24小時.取少量RV沙門增菌液體培養基培養物劃線接種于木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基平板上,30至35攝氏度培養18至48小時小時,或采取其他適宜方法進一步鑒定.
       
      圖:RV沙門增菌液體培養基
      左圖:滅制后未接種的培養基,藏藍色
      右圖:接種乙型副傷寒沙門氏菌后液體狀態,溶液渾濁.
       
      圖:木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基
      菌落為淡紅色或無色、透明或半透明、中心有或無黑色.
       
      原理:酵母浸出粉提供氮源、維生素、生長因子;氯化鈉維持均衡的滲透壓;木塘、乳糖、蔗糖為可發酵糖類,發酵糖產酸的菌落呈黃色;脫氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌,但不影響沙門氏菌的生長;硫代硫酸鈉可以被某些細菌還原硫化氫,與枸櫞酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;
       
      瓊脂是培養基的凝固劑;酚紅為p小時指示劑.
      用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種,培養18至24小時,或采用其他適宜方法進一步鑒定.
       
      3.結果判斷
       
      若XLD上有疑似菌落生長,且三糖鐵瓊脂培養基上的斜面為紅色,底層為黃色,或斜面為黃色、底層黃色或黑色,應進一步進行適宜的鑒定試驗,確證是否為沙門氏菌.
       
      如果平板上沒有菌落生長,或雖有菌落生長但鑒定結果為陰性,或三糖鐵培養基的斜面未見紅色、底層未見黃色;或斜面黃色、底層未見黃色或黑色,判定供試品未檢出沙門菌.
       
      微生物實驗相關的培養基
       
      4.1RV沙門增菌液體培養基
      大豆胨 4.5克,氯化鈉 8.0克,磷酸氫二鉀 0.4克,磷酸二氫鉀 0.6克,無水氯化鎂13.58克,孔雀綠36毫克,ph5.2±0.2(25攝氏度
       
      木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基
      酵母浸出粉3.0克,L-賴氨酸5.0克,木糖3.5克,乳糖7.5克,蔗糖7.5克,脫氧膽酸鈉2.5克,枸櫞酸鐵銨0.8克,硫代硫酸鈉6.8克,氯化鈉5.0克,酚紅0.08克,瓊脂13.5克,ph7.4±0.2(25攝氏度
       
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