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      控制菌檢查法——耐膽鹽革蘭氏陰性菌

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      2015版藥典中非無菌產品微生物限度檢查:控制菌檢查法——耐膽鹽革蘭氏陰性菌
       
      該檢查項下收載了“定性試驗”和“定量試驗”兩部分內容,若標準規定為“不得檢出耐膽鹽革蘭氏陰性菌”,則選擇“定性試驗”檢驗;若標準規定為“膽鹽革蘭氏陰性菌應小于10n cfu/g(ml)”,則選擇“定量試驗”檢驗.
       
      耐膽鹽革蘭氏陰性菌的檢驗流程:樣品制備成1:10的胰酪大豆胨液體培養基(TSB)供試液后,先在20~25℃預培養不超過2小時使細菌復蘇但不增殖,再進行選擇性增菌,最后通過VRBG篩選耐膽鹽革蘭氏陰性菌.
      預培1:10TSB20-25攝氏度小于等于2小時;
      選擇性增菌 定性:取相當于1g至NmlEE;定量:取相當于0.1g,0.01g,0.001g至NmlEE;培養條件:30-35攝氏度,24-25小時;
      分離 BRBG 30-35攝氏度,18-24小時. 
       
      腸道增菌液體培養基(EE)對革蘭氏陰性菌具有良好的選擇性,經EE選擇性增菌后革蘭氏陽性菌應不生長,故若在隨后的紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂上無菌生長,則表明樣品中未污染有耐膽鹽革蘭氏陰性菌.盡管藥典未明確說明VRBG培養基的抑菌能力,但該培養基通過脫氧膽酸鈉和結晶紫等成分仍對革蘭氏陽性菌具有較強的抑制能力.因此,若VRBG瓊脂上有菌生長,且經革蘭氏染色判斷為革蘭氏陰性菌,則表明樣品已被耐膽鹽革蘭氏陰性菌污染;若為革蘭氏陽性菌,則反映培養體系的選擇性抑菌能力不足.
       
      腸道菌增菌液體培養基(12722-1)
       
      一,配方:g/L
      明膠胰酶水解物10.0g
      葡萄糖5.0g
      二水合磷酸氫二鈉 8.0g
      磷酸二氫鉀 2.0g
      牛膽鹽20.0g
      亮綠  0.015g
      pH7.2±0.2 (25℃)
       
      二,配制方法:
      稱取本品45.0g于1L蒸餾水或去離子水中(可按比例增加或減少配制量),沸水浴煮沸30分鐘,冷卻至常溫備用.
       
      三,作用:用于耐膽鹽革蘭陰性菌的選擇性增菌
       
      四,原理:
      明膠胰酶水解物提供蛋白質,維生素和氨基酸;葡萄糖提供碳源;磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑;牛膽鹽和亮綠為選擇性抑菌劑,抑制非腸桿菌科細菌的生長.
       
      五,產品外觀:
      脫水干粉培養基:淡黃色粉末
      培養基溶解后:綠色溶液,澄清透明.
       
      六,生長圖片
       
      紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基(12719-1)
       
      1 配方:g/L
      酵母浸出粉 3.0g
      明膠胰酶水解物7.0g
      葡萄糖10.0g
      氯化鈉5.0g
      脫氧膽酸鈉 1.5g
      中性紅0.03g
      結晶紫0.002g
      瓊脂15.0g
      pH7.4±0.2(25℃) 
      2 配制方法:
      稱取本品41.5g于1L蒸餾水或去離子水中,攪拌煮沸溶解1分鐘,冷卻至50—55℃傾注平板.
      3 作用:用于耐膽鹽革蘭陰性菌的選擇性分離
      4 原理:
      明膠胰酶水解物和酵母浸出粉提供碳氮源和微量元素;葡萄糖是可發酵的糖類;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;脫氧膽酸鈉和結晶紫抑制革蘭氏陽性菌,特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞腸球菌;中性紅為pH指示劑.
      5 產品外觀
      脫水干粉培養基:土黃色粉末
      滅菌后融化狀態培養基::淡紅色,無不溶物
      平板凝膠培養基:紅色凝膠
      6 生長圖片
       
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