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      培養基制備的基本方法和注意事項二

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      培養基制備的基本方法和注意事項二

      6、培養基的過濾澄清
      液體培養基必須絕對澄清,瓊脂培養基也應透明無顯著沉淀,因此,須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求.一般液體培養基可用濾紙過濾法,濾紙應折疊成折扇或漏斗形,以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂.
      瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾.亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾.新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去,再用濾紙反復過濾.如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法.即將冷卻至55至60℃的培養基放入大的三角燒瓶內,裝入量不得超過燒瓶容量的1/2,每1000毫升培養基加入1至2個雞蛋的蛋白,強力振搖3至5分鐘,置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可.
       
      7、培養基的分裝
      培養基的分裝,應按使用的目的和要求,分裝于試管、燒瓶等適當容器內.分裝量不得超過容器裝盛量的2/3.容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵,其外還須用防水紙包扎(現試管一般多有用螺旋蓋者).分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器.分裝瓊脂斜面培養基時,分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為洽當.分裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒,以利于培養基的徹底滅菌.每批培養基應另外分裝20毫升培養基于一小玻璃瓶中,隨該批培養基同時滅菌,以為測定該批培養基最終pH之用.
       
      8、培養基的滅菌
      一般培養基可采用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法.在各種培養基制備方法中,如無特殊規定,即可用此法滅菌.
      某些畏熱成分,如糖類,應另行配成20%或更高的濃液,以過濾或間歇滅菌法消毒,以后再用無菌操作技術、定量加于培養基.明膠培養基亦應用較低溫度滅菌.血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入于經冷卻約50℃左右的培養基中.
      瓊脂斜面培養基應在滅菌后立即取出,冷至55℃-60℃時,擺置成適當斜面,待其自然凝固.
       
      9、培養基的質量測試
       
      每批培養基制備好以后,應仔細檢查一遍,如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去.并測定其最終pH.
      將全部培養基放入36±1℃恒溫箱培養過夜,如發現有菌生長,即棄去.
      用有關的標準菌株接種1至2管或瓶培養基,培養24至48小時,如無菌生長或生長不好.應追查原因并重復接種一次,如結果仍同前,則該批培養基即應棄去,不能使用.
       
      10、培養基的保存
      培養基應存放于冷暗處,最好能放于普通冰箱內.放置時間不宜超過一周,傾注的平板培養基不宜超過3天.每批培養基均必須附有該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽.
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