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      生物指示菌片無菌檢驗規范

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      生物指示菌片無菌檢驗規范

      目的:規定滅菌工序質量監測點的檢驗方法,有效的控制該工序質量.
      范圍:本方法適用于滅菌工序生物指示菌片的無菌檢驗.
      檢驗方法原理:將枯草桿菌黑色變種芽胞菌片置培養基內,在一定的溫度下培養,觀察細菌是否生長.
      在配制培養基前,先配少量培養基觀察其滅菌后是否有渾濁,長菌情況是否良好,合格后方可大量配制.在更換廠牌號時應重試.
      制備各種培養基時,可用2mol/L鹽酸或2mol/L氫氧化鈉溶液適量調節PH值,使滅菌后的PH值在規定范圍內.
      營養肉湯的配制:按瓶裝上的說明書要求配制,溶解,攪拌均勻,每支試管分裝15-20培養基,滅菌.
      在使用前,培養基須經35±2培養48h.
      制備好的培養基應保存在2~25、避光的環境.培養基若保存于非密閉容器中,一般在三周內使用;若保存于密閉容器中,一般可在一年內使用.
      儀器與設備:超凈工作臺、高壓蒸氣滅菌器、9cm直徑雙碟、鑷子、剪刀.
      試驗前準備
      器具滅菌:與供試液接觸的所有器具應采用可靠的方法滅菌,置壓力蒸汽滅菌器內121 30mim,或置電熱干燥箱內160 2h.
       
      無菌室要求
      無菌室操作臺或超凈工作臺局部應符合潔凈度100級單向流空氣區域要求.無菌室內除定期用甲醛加高錳酸鉀(或甲醛蒸汽)消毒外,每次操作前用75%灑精或消毒溶液擦試工作臺面及一些可能污染的死角.用紫外燈殺菌至少30分鐘.在每次操作完畢后,同樣用上述液體擦試工作面.    無菌室在消毒處理完畢后,應檢查空氣中的菌落數,方法如下:取內徑90mm雙碟,無菌操作注入融化的大豆酪蛋白瓊脂培養基20ml,制成平板,先在30~35培養48h證明無菌后,取雙碟平板3只,在無菌室操作臺內平均放置,打開碟蓋,暴露30mim后蓋好,置30~35培養48h后取出檢查,3只雙碟上生長的菌落數平均不得超過1個.無菌試驗過程中也需要檢查無菌室的菌落數,方法同上.在試驗開始進行時,打開碟蓋,至試驗結束蓋好,照上法培養,應符合上述要求.
      試驗方法
      按無菌操作法,每一滅菌柜將已滅菌的菌片(枯草桿菌黑色變咱芽胞Atcc9372,含菌量2.4×106)分別接種于營養肉湯培養基(1個菌片/管),另取2管營養肉湯培養基,1管接種1個未滅菌的菌片,供作陽性對照,另1管作為陰性對照.接種后,上述接種后的培養基按規定的溫度培養7天.
       
      結果判定
      如培養基均為澄清的藍色或顯渾濁但經證明并非有菌生長,判定為合格.如培養基中任何一管藍色消失、顯渾濁或有菌膜并確證為有菌生長,判定為不合格.監測結果只有在陽性對照的生物指示劑有菌生長時才有效.除陽性對照管外,其他各管均不得有菌生長,否則應判為不合格.如果出現陽性結果,增加生物指示劑放置數量和位置點數,重復滅菌周期.如果再次出現陽性結果,對滅菌柜、操作過程等相關因素進行調查. 
       
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