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      食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      GB 4789.2-2016 食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定

      2016-12-23發布 2017-06-23實施
       
      中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會國家食品藥品監督管理總局發布
       
      GB4789.2—2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》
       
      前言:
       
      本標準代替GB4789.2—2010《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》.
       
      范圍
       
      本標準規定了食品中菌落總數(Aerobic plate count)的測定方法.
       
      本標準適用于食品中菌落總數的測定.
       
      術語和定義
       
      菌落總數 aerobic plate count
       
      食品檢樣經過處理,在一定條件下(如培養基、培養溫度和培養時間等)培養后,所得每g(毫升)檢樣中形成的微生物菌落總數.
       
      設備和材料
       
      除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
       
      恒溫培養箱:36攝氏度±1攝氏度,30攝氏度±1攝氏度.
       
      冰箱:2攝氏度至5攝氏度.
       
      恒溫水浴箱:46攝氏度±1攝氏度.
       
      天平:感量為0.1g.
       
      均質器.
       
      振蕩器.
       
      無菌吸管:1毫升(具0.01毫升刻度)、10毫升(具0.1毫升刻度)或微量移液器及吸頭.
       
      無菌錐形瓶:容量250毫升、500毫升.
       
      無菌培養皿:直徑90毫米.
       
      pH計或pH比色管或精密pH試紙.
       
      放大鏡或/和菌落計數器.
       
      培養基和試劑
       
      平板計數瓊脂培養基
       
      磷酸鹽緩沖液
       
      無菌生理鹽水
       
      檢驗程序
       
       
      菌落總數的檢驗程序見圖1.
      菌落總數的檢驗程序圖片
       
      操作步驟
       
      樣品的稀釋
       
      固體和半固體樣品:稱取25g樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內,8000r/分鐘至10000r/分鐘均質1分鐘至2分鐘,或放入盛有225毫升稀釋液的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1分鐘至2分鐘,制成1∶10的樣品勻液.
       
      液體樣品:以無菌吸管吸取25毫升樣品置盛有225毫升磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)中,充分混勻,制成1∶10的樣品勻液.
       
      用1毫升無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1毫升,沿管壁緩慢注于盛有9毫升稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1
       
      支無菌吸管反復吹打使其混合均勻,制成1∶100的樣品勻液.
       
      按6.1.3操作,制備10倍系列稀釋樣品勻液.每遞增稀釋一次,換用1次1毫升無菌吸管或吸頭.
       
      根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個至3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括液),在進行10倍遞增稀釋時,吸取1毫升樣品勻液于無菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿.同時,分別吸取1毫升空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照.
       
      及時將15毫升至20毫升冷卻至46攝氏度的平板計數瓊脂培養基(可放置于46攝氏度±1攝氏度恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻.
       
      培養
       
      待瓊脂凝固后,將平板翻轉,36攝氏度±1培養48h±2h.
       
      水產品30攝氏度±1攝氏度培養72h±3h.
       
      如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時,可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基(約4毫升),凝固后翻轉平板,按6.2.1條件進行培養.
       
      菌落計數
       
      可用肉眼觀察,必要時用放大鏡或菌落計數器,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量.菌落計數以菌落形成單位(colony-for分鐘gunits,CFU)表示.
       
      選取菌落數在30CFU至300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數.低于3
       
      0CFU的平板記錄具體菌落數,大于300CFU的可記錄為多不可計.每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數.
       
      其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計半個平板后乘以2,代表一個平板菌落數.
       
      當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數.
       
      結果與報告
       
      菌落總數的計算方法
       
      若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(毫升)樣品中菌落總數結果.
       
      若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時,按式(1)計算:
       
        N =ΣC/(n1+0.1n2)d (1)
       
      式中:N :樣品中菌落數;
       
      ΣC:平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;
       
        n1:第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個數;
       
        n2:第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個數;
       
       d :稀釋因子(第一稀釋度).
       
      若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度的平板菌落數均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1
       
      乘以最低稀釋倍數計算.
       
      若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU至300CFU之間,其中一部分小于30CFU
       
      或大于300CFU時,則以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算.
       
      菌落總數的報告
       
      菌落數小于100CFU時,按“四舍五入”原則修約,以整數報告.
       
      菌落數大于或等于100CFU時,第3位數字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數字后面用0代替位數;也可用10的指數形式來表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數字.
       
      若所有平板上為蔓延菌落而無法計數,則報告菌落蔓延.
       
      若空白對照上有菌落生長,則此次檢測結果無效.
       
      稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/毫升為單位報告.
       
      附錄 A
       
      培養基和試劑
       
      平板計數瓊脂(plate count agar,PCA)
      平板計數瓊脂圖片
      培養基
       
      成分
       
      胰蛋白胨 5.0g
       
      酵母浸膏 2.5g
       
      葡萄糖  1.0g
       
      瓊脂 15.0g
       
      蒸餾水  1000毫升
       
      制法
       
      將上述成分加于蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH值7.0±0.2.分裝試管或錐形瓶,121 攝氏度高壓滅菌15分鐘.
       
       
      成分
       
      磷酸二氫鉀(KH2PO4)  34.0g
       
      蒸餾水   500毫升
       
      制法
       
      貯存液:稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500毫升蒸餾水中,用大約175毫升的1mol/L 
       
      液調節pH到7.2,用蒸餾水稀釋到1000毫升后貯存于冰箱.稀釋液:取貯存液1.25 毫升,用蒸餾水稀釋到1000 毫升,分裝于適宜容器中,121 攝氏度高壓滅菌15分鐘.
       
      無菌生理鹽水
       
      成分
       
      氯化鈉 8.5g
       
      蒸餾水  1000毫升
       
      制法
       
      稱取8.5g氯化鈉溶于1000毫升蒸餾水中,121攝氏度高壓滅菌15分鐘.
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