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      GB5009.154-2016食品中維生素B6的測定

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

      培養基用哪個廠家好


      GB5009/5413系列相關培養基的用途及特點

      二.GB5009.154-2016食品中維生素B6的測定

      1.定義
      維生素B6(Vita分鐘B6)又稱吡哆素,其包括吡哆醇.吡哆醛及吡哆胺,在體內以磷酸酯的形式存在,是一種水溶性維生素,遇光或堿易破壞,不耐高溫.1936年定名為維生素B6.維生素B6為無色晶體,易溶于水及乙醇,在酸液中穩定,在堿液中易破壞,吡哆醇耐熱,吡哆醛和吡哆胺不耐高溫.維生素B6在酵母菌.肝臟.谷粒.肉.魚.蛋.豆類及花生中含量較多.維生素B6為人體內某些輔酶的組成成分,參與多種代謝反應,尤其是和氨基酸代謝有密切關系.臨床上應用維生素B6制劑防治妊娠嘔吐和放射病嘔吐.
      2.本標準代替GB/T5009.154-2003《食品中維生素B6的測定》.GB5413.13-2010《食品安全國家標準嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測定》.
      3.第二法微生物法
      ①原理
      食品中某一種細菌的生長必須要有某一種維生素的存在,卡爾斯伯酵母菌在有維生素B6存在的條件下才能生長,在一定條作下維生素B6的量與其生長呈正比關系.用比濁法測定該菌在試樣液中生長的渾濁度,與標準曲線相比較得出試樣中維生素B6的含量.
      ②涉及培養基種類:
      12309吡哆醇Y培養基
      12309-1吡哆醇Y瓊脂培養基
      11154麥芽浸粉瓊脂培養基
      11170-1YM肉湯培養基
      ③培養基涉及流程詳解
      菌種的制備及保存(避光處理)
      菌種復壯:卡爾斯伯酵母,ATCC#9080菌種或等效菌種凍干品,加入約0.5毫升YM肉湯培養基或生理鹽水復溶,取幾滴復溶的菌液分別接種2支裝有10毫升YM肉湯培養基的試管中,于30攝氏度水浴振蕩培養20h至24h.
      月儲備菌種制備:將菌種復壯培養液劃線接種于YM肉湯瓊脂培養基(傳代培養基)斜面上,于30攝氏度培養20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內保存,此菌種為第一代月儲備菌種;以后每月將上一代的月儲備菌種劃線接種于YM肉湯瓊脂培養基(傳代培養基)斜面,于30攝氏度培養20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內保存,有效期一個月,此菌種為當月儲備菌種.
      周儲備菌種制備:每周從當月儲備菌種接種于YM肉湯瓊脂培養基(傳代培養基)斜面,于30攝氏度培養20h至24h,于2攝氏度至8攝氏度冰箱內保存,有效期7d.保存數星期以上的菌種,不能立即用作制備接種液之用,一定要在使用前每天移種一次,連續2d至3d,方可使用,否則生長不好.
      接種菌懸液制備:在維生素B6測定實驗前一天,將周儲備菌種轉接于10毫升YM肉湯培養基(種子培養液)中,可同時制備2管,于30攝氏度振蕩培養20h至24h,得到測定用的種子培養液,從月儲備菌種到種子培養液總代數不超過5代.將該種子培養液于3000r/分鐘下離心10分鐘,傾去上清液;用10毫升生理鹽水洗滌,離心,傾去上清液,用生理鹽水重復洗滌2次;再加10毫升消毒過的生理鹽水,將離心管置于渦旋混勻器上充分混合,使菌種成為混懸液,將此菌懸液倒入已消毒的注射器內,立即使用.
      試樣處理
      標準曲線的制備:3組試管各加0.00毫升.0.02毫升.0.04毫升.0.08毫升.0.12毫升和0.16毫升吡哆醇工作液,再加吡哆醇Y培養基補至5.00毫升,混勻,加棉塞.
      試樣管的制備:在試管中分別加入0.05毫升.0.10毫升.0.20毫升樣液,再加入吡哆醇Y培養基補至5.00毫升,用棉塞塞住試管,將制備好的標準曲線和試樣測定管放入高壓釜121攝氏度下高壓滅菌10分鐘,冷至室溫備用.
       
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