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      化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

      國產/一次性無菌培養皿測五指用


      化妝品微生物標準檢驗方法金黃色葡萄球菌
       
      金黃色葡萄球菌在外界分布較廣,抵抗力也較強,能引起人體局部化膿性病灶,嚴重時可導致敗血癥,因此化妝品中檢驗金黃色葡萄球菌有重要意義.
      方法提要
      根據本菌特有的形態及培養特性,應用BairdParker平板進行分離,該平板中的氯化鋰可抑制革蘭
      氏陰性細菌生長,丙酮酸鈉可刺激金黃色葡萄球菌生長,以提高檢出率,并利用分解甘露醇和血漿凝固
      酶等特征.以茲鑒別.
      培養基和試劑
      培養基
      SCDLP液體培養基
      SCDLP液體培養基基礎的圖片
      見克B7918.1-87《化妝品微生物標準檢驗方法總則》.
      7.5%的氯化鈉肉湯
      成分:
      蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化鈉75克,蒸餾水1000毫升
      制法:將上述成分加熱溶解,調pH為7.4,分裝,121攝氏度(151b)15分鐘高壓滅菌.
      BairdParker平板
      成分:胰蛋白胨10克,牛肉膏5克,酵母浸膏1克,丙酮酸鈉10克,甘氨酸12克,氯化鋰(LiCl.6H,0)5克,瓊脂20克,蒸餾水950毫升,pH7.0士0.2
      增菌劑的配制:30%卵黃鹽水50毫升與除菌過濾的1%亞碲酸鉀溶液10毫升混合,保存于冰箱內.制法:將各成分加到蒸餾水中,加熱煮沸完全溶解,冷至25C校正pH.分裝每瓶95毫升,121攝氏度高壓滅15分鐘.臨用時加熱溶化瓊脂,每95毫升加入預熱至50攝氏度的卵黃亞碲酸鉀增菌劑5毫升,搖勻后傾注平板.培養基應是致密不透明的.使用前在冰箱儲存不得超過48h.
       
      血瓊脂培養基
      成分:營養瓊脂100毫升,脫纖維羊血(或兔血)10毫升
      制法:將營養瓊脂加熱溶化,待冷至50攝氏度左右以無菌手續加入脫纖維羊血,搖勻,制成平板,置冰箱內備用.
      甘露醇發酵培養基
      成分:蛋白胨10克,氯化鈉5克,甘露醇10克,牛肉膏5克,0.2%溴麝香草酚藍溶液12毫升,蒸餾水1000毫升
      制法:將蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中,加熱溶解,諞pH7.4,加入甘露醇和指示劑,混勻后分裝試管中,115C(10Ib)20分鐘滅菌備用.
      兔(人)血漿制備
      取3.8%檸檬酸鈉溶液[121C(15lb)30分鐘滅菌]1份加兔(人)全血4份,混勻靜置,2000~3000r/分鐘離心3~5分鐘.血球下沉,取上面血漿.
      設備和材料
      顯微鏡,培養箱,離心機,滅菌吸管:1毫升,5毫升,10毫升,滅菌試管,載玻片,酒精燈.
      操作步驟
      增菌:取1;10稀釋的樣品10毫升接種到90m!SCDLP液體培養基中(如無此培養基也可用7.5%氯化鈉肉湯),置37C培養箱,培養24h.
      注:如無此培養基也可用7.5%氯化鈉肉湯,檢驗含防腐劑的化妝品時,可在1000毫升此培養基中加1克卵磷脂、7克吐溫80.分離:自上述增菌培養液中,取1~2接種環,劃線接種在BairdParker氏培養基,如無此培養基也可劃線接種到血瓊脂平板,置37攝氏度培養24~48h.在血瓊脂平板上菌落呈金黃色,大而突起,圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈.在BairdParker氏培養基上為圓形,光滑,凸起,濕潤,直徑為2~3毫米,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為--混濁帶,在其外層有--透明帶.用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的軟度.偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落,但無混濁帶及透明帶.挑取單個菌落分純在血瓊脂平板上,置37攝氏度培養24h.染色鏡檢:挑取分純菌落,涂片,進行革蘭氏染色,鏡檢.金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性菌,排列成葡萄狀,無芽胞,無夾膜,致病性葡萄球菌,菌體較小,直徑約為0.5~lμm.甘露醇發酵試驗:取上述分純菌落接種到甘露醇發酵培養基中,置37攝氏度培養24h,金黃色葡萄球菌應能發酵甘露醇產酸.
      血漿凝固酶試驗
      玻片法:取清潔千燥載玻片,一端滴加一-滴滅菌生理鹽水,另一端滴加一滴血漿,用接種環挑取待檢菌落,分別在生理鹽水及血漿中充分研磨混合.血漿與菌苔混懸液在5分鐘內出現團塊或顆粒狀凝塊時,而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現象者為陽性,如兩者均無凝固現象則為陰性.凡玻片試驗呈陰性反應或鹽水滴與血漿滴均有凝固現象,再進行試管凝固酶試驗.試管法:吸取1;4新鮮血漿0.5毫升,放入滅菌小試管中,再加入待檢菌24h肉湯培養物0.5毫升.混勻,放37攝氏度溫箱或水浴中,每半小時觀察一次,24h之內如呈現凝塊即為陽性.同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物及肉湯培養基各0.5毫升,分別加入滅菌小試管內0.5毫升1:4血漿混勻,做為對照.
      檢驗結果報告
      凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長,經染色鏡檢,證明為革蘭氏陽性葡萄球菌,并能發酵甘露醇產酸.血漿凝固酶試驗陽性者,可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌.
      附加說明:
      本標準由中國預防醫學科學院環境衛生監測所歸口.本標準由“化妝品微生物標準檢驗方法”起草小組起草.本標準主要起草人劉以賢.本標準由中國預防醫學科學院環境衛生監測所負責解釋.
       
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