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      假單胞菌屬及常規檢測鑒定

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

      一次性平皿接觸碟


      假單胞菌屬及常規檢測鑒定
       
      介紹
      椰毒假單胞菌酵米面亞種(Psedomonas cocovenenans supsp.farino fermentans)是我國發現的一種新的食物中毒菌,它存在于發酵的玉米、糯玉米、黃米、高梁米、變質銀耳以及周圍環境中,它是酵米面及變質銀耳中毒的病原菌.該菌產生的毒素米酵菌酸是其致病原因.
      該食物中毒的主要癥狀,開始患者感到上腹部不適,少數出現腹瀉、惡心、嘔吐,嘔吐物多為咖啡色,嚴重者出現黃疸.昏迷、四肢抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留,呈現休克而死亡.目前尚無特效的治療辦法.
      該菌為革蘭氏陰性桿菌,長2.5-3μm,寬0.5-1.0μm,呈桿狀、球桿狀或稍彎曲,兩端鈍圓,無芽胞,有鞭毛.
      本菌為兼性厭氧,但易在表面生長.最適生長溫度為37攝氏度,最適產毒溫度為26攝氏度.pH5-7范圍內生長較好.
      本菌抵抗力較弱,56攝氏度5分鐘即可殺死,對各種常用消毒劑抵抗力也不強.
       
      檢驗方法:
      樣品先在GVC增菌液中進行增菌,然后劃線接種于PDA平板,挑選可疑菌落進行革蘭氏染色觀察及氧化酶試驗.如為革蘭氏陰性小桿菌,氧化酶試驗陰性,再接種于卵黃瓊脂平板和SS平板.
      從卵黃瓊脂平板上挑取卵磷脂酶陽性、并帶有彩虹環的單個菌落,接種于馬鈴薯-葡萄糖瓊脂斜面,獲得純培養物.
      將純培養物分別接種于Hugh-Leifson培養基,蛋白胨水,緩沖蛋白胨水,西蒙氏檸檬酸鹽培養基,糖發酵管及苯丙酸培養基,進行生化反應試驗.
      同時利用純培養物進行血清分型鑒定.
      初步鑒定為椰毒假單胞菌酵米面亞種的菌株,進行產毒培養和小鼠毒力試驗,同時進行米酵菌酸的測定.
       
      說明:
      分離培養:
      該菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂平板上菌落為1~2毫米灰白色或乳黃色,光滑、濕潤,邊緣整齊,培養48h后,中心有凸起,呈草帽狀,菌落周圍產生黃綠色色素,擴散到基質中.
      在卵黃瓊脂平板上,菌落表面光滑,濕潤,48h后,菌落周圍形成乳白色混濁環,在斜射日光下,可見環的周圍呈現虹彩現象.
      該菌在SS瓊脂平板上不生長.
       
      O/F試驗
      將該菌培養在Hugh-leifson培養基,方法是挑取少量培養物做穿刺接種,同時接種兩支培養基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂1~2毫升于表面,放30攝氏度培養.該菌為氧化型.封口培養不產酸,開口培養產酸.
       
      本菌與假單胞菌的鑒別
      椰毒假單胞菌酵米亞種與椰毒假單胞菌各種培養性狀,生物第學性狀基本一致,只在側金盞花醇的利用上有區別.椰毒假單胞菌酵米亞種側金盞花醇為陽性.
       
      米酵菌酸的判定
      從中毒樣品中提取米酵菌酸,包括發酵食品或變質銀耳,或分離出的椰毒假單胞菌酵米面亞種中提取的米酵菌酸,其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg(食品)才有意義
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