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      耶爾森氏菌概念特性和檢驗方法

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

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      耶爾森氏菌概念特性和檢驗方法

      耶爾森氏菌屬包括11個種,其中對人有致病性的有三種:小腸結腸炎耶爾森氏菌、假結核菌和鼠疫菌.只有小腸結腸炎耶爾森氏菌和假結核菌已確定是食源性病原體.鼠疫耶爾森氏菌引起黑疽病,不通過食品傳染.
       
      一、生物學特性
       
      1、形態特性:本菌為革蘭氏陰性桿菌或球桿菌,大小為1-3.5×0.5-1.3μm,多單個散在,有時排列成短鏈或成堆.本菌不形成芽胞,無莢膜,有周鞭毛;但其鞭毛在30攝氏度以下培養條件形成,溫度較高時即喪失,因此表現為30攝氏度以下有動力,而35攝氏度以上則無動力.
       
      2、培養特性:本菌生長溫度為30-37攝氏度,但在22-29攝氏度才能使本菌的某些特性出現.4攝氏度時能保存和繁殖.本菌世代時間長,最短亦需40分鐘左右.在SS或麥康凱瓊脂上于25攝氏度經24小時培養,菌落細小,至48小時直徑才增大成0.5-3.0毫米.菌落圓整、光滑、濕潤、扁平或稍隆起,透明或半透明;在麥康凱瓊脂上菌落淡黃色,如若微帶紅色,則菌落中心的紅色常稍深.本菌在肉湯中生長呈均勻混濁,一般不形成菌膜.
       
      3、生化特性
       
      本菌的生化特性及其與近緣菌的鑒別
       
      4、生物型
       
      小腸結腸炎耶爾森氏菌的生物型分類方法有幾種,目前FDA細菌分析手冊第八版中采用的是Wanters 1981的分型方法.
       
      小腸結腸炎耶爾森氏菌的生物型
       
      V 表示可變反應   C 在日本發現血清型為0:3的生物型
       
      5、血清型:小腸結腸炎耶爾森氏菌菌株根據其耐熱性和耐受高壓滅菌的菌體抗原能被血清學分型.Wanters將小腸結腸炎耶爾森氏菌和相關菌歸納為54個血清群,Aleksii和Bockemuh等人提議將小腸耶氏菌的血清群簡化為18個群.目前下列血清群的致病菌株已通過鑒定,它們是0:1,2a,3;0:2a,3;0:3;0:8;0:9;0:4,32;0:5,27;0:12,25;0:13a,13b;0:19;0:20;0:21.引起人類疾病的主要血清群是0:3,0:8,0:9和0:5,27.
       
      二、流行病學
       
      1、細菌分布:小腸結腸炎耶爾森氏菌分布很廣,可存在于生的蔬菜、乳和乳制品、肉類、豆制品、沙拉、牡蠣、哈和蝦.也存在于環境中,如湖泊、河流、土壤和植被.已從家畜、狗、貓、山羊、灰鼠、水貂和靈長類動物的糞便中分離出該菌.在港灣周圍,許多鳥類包括水禽和海鷗可能是帶菌者.
       
      豬的帶菌率較高,日本報告檢出率為4%,加拿大為3.6%,丹麥為10-17%.在豬中,該菌最易在扁桃腺中發現.
       
      本菌對易染人群為嬰幼兒,常引起發熱、腹痛和帶血的腹瀉.
       
      三、致病性
       
      1、腸毒素:該菌能產生耐熱性腸毒素,(分子量為10000-50000),能耐熱121攝氏度30分鐘,能在4攝氏度保存7個月,pH1-11中穩定.但腸毒素的產生僅限于22-25攝氏度.血清型03、08和09幾乎經常產生腸毒素,在其他血清型中也有產生腸毒素的菌株.該腸毒素被攝入即可引起發病.
       
      2、侵襲性:Hela細胞感染,血清型O1、O3、O4、O5B、O8、O9、O15、O18、O20、O21和O22都能侵入Hela細胞,鑒于Hela細胞感染陽性株多是人類致病的常見血清型,以及從人和動物死亡所見腸類的侵入模型,表明Hela細胞侵入性在小腸結腸炎耶爾森氏菌腹瀉的發病機理上是重要的.
       
      Sereny試驗,有人將11株小腸結腸炎耶爾森氏菌的菌懸液接種于豚鼠眼結膜,有6株引起嚴重的角膜結膜炎,即Sereny試驗陽性.這6株均為O8血清型.
       
      3、自凝性:1980年Laird等人提出了一種測定本菌毒力的簡易方法,即將試驗菌接種于二管含10%小牛血清的組織培養液內,分別置22攝氏度和36+1攝氏度培養,若22攝氏度培養,菌液混濁,而37攝氏度培養,細菌凝結,上層液體透明,即為有毒力的菌株,稱為自凝陽性.在檢查的180株菌中有25株陽性,這些陽性菌株均能引起腹瀉.
       
      4、VW抗原:已知該菌的某些菌株具有與鼠疫耶爾森氏菌和假結核耶爾森氏菌在免疫學上相同的VW抗原.其在37攝氏度生長時需要鈣而在25攝氏度生長時不需要鈣的菌株即含VW抗原.Karmali等人將從病人糞便檢出的O21血清型自凝陽性的菌株,在草酸鎂瓊脂上于35攝氏度培養不生長,用于口服小鼠則產生腹瀉.可見自凝陽性與缺鈣培養基上35攝氏度無生長能力是一致的,能使小鼠發生腹瀉.
       
      5、毒性質粒:耶氏菌病和小腸結腸炎耶爾森氏菌帶有41-48Mdal的質粒有關.這被認為是毒性質粒,即與毒力有關的質粒.有人將失去毒性質粒的O8、O3和O9型菌株用小鼠作喂飼試驗,均不發病,但用帶毒性質粒的O8和O3型菌株試驗時,小鼠則均發生腹瀉或死亡.且菌株自凝試驗的結果與毒性質粒的存在與否相一致.
       
      四、檢驗與控制
       
      A、增菌
       
      1、無菌稱取25.0g樣品于225毫升,蛋白胨山梨醇膽汁肉湯(PSBB)中,均質30秒,置10攝氏度培養10天.
       
      2、如果懷疑產品為高含量耶氏菌,在肉湯培養前各取0.1毫升劃線于麥康凱瓊脂和cefsulodin&#0;irgasan&#0;新生霉素(CIN)瓊脂.然后取1毫升均質液至9毫升 0.5%鹽水(含0.5%KOH)中,混合數秒鐘,各取0.1毫升 劃線麥康凱和CIN瓊脂平板.將平板置30攝氏度培養1天,把平板上生長的菌落轉移到Whatmam541濾紙上,用于DNA克隆雜交技術直接檢測耶氏菌的致病基因.如果耶氏菌含量較低,省去這一步.
       
      3、將經10天培養的增菌肉湯充分混合,轉移0.1毫升至1毫升 0.5%鹽水(含0.5%KOH)中,混合5-10秒.連續劃線于麥康凱平板和CIN平板.另取0.1毫升增菌液至1毫升 0.5%鹽水中,如上在劃線前混合5-10秒.置平板于30攝氏度培養1天.
       
      B、細菌分離.
       
      檢查經1天培養的麥康凱平板,排除紅色或粘液狀菌落,挑取小的(直徑1-2毫米),偏平,無色的或淡粉紅色菌落.同時檢查CIN平板,挑取具有緊紅色中心整個邊緣明顯無色的小菌落(直徑1-2毫米).用接種針將所選菌落穿刺接種于賴氨酸精氨酸鐵瓊脂(LAIA)斜面.Christensen&#0;s尿素瓊脂平板或斜面.膽汁七葉甙瓊脂平板或斜面.室溫培養48小時.在LAIA中的培養物會產生鹼性斜面,酸性底層,不產生氣體和H2S(KA--)的反應,被認為是尿素酶陽性的可疑耶氏菌.去除在LAIA中產H2S或產氣或尿素酶陰性的培養物.
       
      耶爾森氏菌為兼性厭氧菌,生長溫度為-1&#0;48攝氏度,能在反復冷凍,緩化下存活.由于該菌可在4攝氏度下進行冷增菌,因此保存在4-5攝氏度冰箱中的食品具有污染的危險.該菌要求較高的水活度,最低水活度為0.95,pH接近中性,較低的耐鹽性.對加熱、消毒劑敏感.
       
      控制耶爾森氏菌的關鍵因素包括適當的蒸煮或巴氏滅菌,適宜的食品處理以防止二次污染.進行水處理、合理使用消毒劑等控制措施.
       
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