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      埃希氏大腸菌及檢驗

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

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      埃希氏大腸菌及檢驗
       
      一、定義:
       
      大腸埃希氏菌習慣稱為大腸桿菌,分類于腸桿菌科,歸屬于埃希氏菌屬,并且大腸桿菌株ATCC 11775是該屬的模式菌種.大腸桿菌的不同菌株間DNA相關性為80%,而與同科的志賀氏菌屬(除鮑氏志賀氏菌外)的DNA相關性可達80-87%.與人類疾病有關的大腸桿菌,統稱為致瀉性大腸桿菌(此名稱不易與致病性大腸桿菌相混淆),一般包括五種:即腸毒素性大腸桿菌(ETEC)、致病性大腸桿菌(EPEC)、出血性大腸桿菌(EHEC)、侵襲性大腸桿菌(EIEC)和粘附性大腸桿菌(EAEC).
       
      二、生物學特性:
       
      基本形態特征:
       
      此菌為兩端鈍圓的短小桿菌,一般大小約0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生長條件不同,個別菌體可呈近似球狀或長絲狀.此菌多單獨存在或成雙,但不呈長鏈狀排列.約有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能運動,但多數菌體只有1-4根,一般不超過10根,故菌體動力弱;多數菌株生長有比鞭毛細、短、直且數量多的菌毛,有的菌株具有莢膜或微莢膜;不形成芽胞,對普通堿性染料著色良好,革蘭氏染色陰性.
       
      培養特征:
       
      由于此菌合成代謝能力強,在含無機鹽、胺鹽、葡萄糖的普通培養基上生長良好.最適生長溫度為37攝氏度,在42-44攝氏度條件下仍能生長,生長溫度范圍為15-46攝氏度.在普通營養瓊脂上生長表現3種菌落形態:(1)光滑型: 菌落邊緣整齊,表面有光澤、濕潤、光滑、呈灰色,在生理鹽水中容易分散.(2)粗糙型:菌落扁平、干澀、邊緣不整齊,易在生理鹽水中自凝.(3)粘液型:常為含有莢膜的菌株.此菌兼性厭氧,在有氧條件下生長良好,最適生長pH為6.8-8.0,所用培養基pH為7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0則生長緩慢.
       
      生化反應與血清學反應
       
      大腸桿菌屬于衛生學意義的大腸菌群和糞大腸菌群的范疇,因此,必須符合大腸菌群和糞大腸菌群的有關定義,在檢測大腸菌群、糞大腸菌群的基礎上,可以應用I(吲哚)、M(甲基紅)、Vi(3羥基-2-丁酮)、C(檸檬酸)即IMViC生化試驗對大腸桿菌作進一步鑒定,其IMViC結果為++--或-+--.生化反應是鑒定大腸桿菌的主要方法之一,然而,大腸桿菌之間生化反應的差異非常常見,象:許多菌種非/遲發酵乳糖,但并不說明它們遺傳上有明顯不同,生化反應非典型的大腸桿菌菌株與典型菌株的DNA相關性在85%-100%.附表1為大腸桿菌生化反應特性表.其中H2S、脲酶、阿糖酸、吲哚、ONPG試驗常為選生化反應,其余為進一步的生化試驗.大腸桿菌在賴氨酸脫羧酶、粘質酸鹽、醋酸鹽生化試驗中,有一項或多項試驗陽性,且厭氧性生長弱,有動力和吲哚試驗陽性可與志賀氏菌相鑒別.
       
      大腸桿菌的血清學反應,往往是對經分離、鑒定、確證為大腸桿菌的進一步分型,常不作為常規方法使用.附表2所列主要致瀉性大腸桿菌的血清型.對大腸桿菌的分型鑒定工作,基層檢驗單位若有要求時,可與各地所屬出入境檢驗檢疫局實驗室聯系,委托進行血清學鑒定工作.
       
      三、大腸桿菌的抵抗力:
       
      此菌對理化因素的抵抗力,在無芽胞菌中是最強的一種,在室溫可存活數周,在土壤、水中存活數月,耐寒力強,但是在30分鐘內快速冷凍,將37攝氏度降至4攝氏度的過程,可殺死此菌.加熱60攝氏度,30分鐘,此菌可滅活.對漂白粉,酚、甲醛等較敏感,水中1ppb氯可殺死此菌.此菌耐膽鹽,在一定程度上能抵抗煌綠等染料的抑菌作用,在選擇性培養基配制上,常利用此菌這一性質.
       
      四、衛生學意義與流行學
       
      由于大腸桿菌是人及各種動物腸道中的正常寄居菌,常隨糞便從人及動物體排出,廣泛散播于自然界,所以一旦檢出大腸桿菌,即意味著直接或間接地被糞便污染,而在衛生學上被用于飲水,牛奶或食品等的糞源性污染衛生細菌學指標;并且由于大腸桿菌在外界存活時間與一些主要腸道病原菌相近,它的出現也可能預示著某些腸道病原菌(例:沙門氏菌、志賀氏菌)的存在,因此該細菌是國際上公認的衛生監測指示菌.近來,有些國家在執行HACCP管理中,將大腸桿菌檢測作為微生物污染狀況的監測指標和HACCP實施效果的評估指標.
       
      致瀉性大腸桿菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病,其中尤以EPEC、ETEC所占比例為大.附表3是我國部分省市主要腹瀉病原體檢出率情況,盡管目前報道各地主要腹瀉病是由志賀氏菌或輪狀病毒引起的,但是,多年來,致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉病例始終位于第二位,可見大腸桿菌腸道傳染的廣泛性.還有,致瀉性大腸桿菌亦可常年引發人體腹瀉,以夏秋季為高峰,在患者感染住院率中,嬰幼兒占60%以上.近來,EHEC O157:H7為世界衛生組織(WHO)定為新的食源性致病菌,其引發的出血性腸炎的暴發或散發病例,自1983年以來在北美州(美國、加拿大)地區逐年增多,英國、日本亦有爆發和散發病例報道,我國也發現散發病例,尚未有爆發EHEC的報道.附表4為近幾年EHEC的污染狀況.
       
      五、大腸桿菌檢驗程序圖解:
       
      LST肉湯
       
      37攝氏度,48h
       
      LST肉湯管陽性 (疑似大腸菌群)37攝氏度,48h
       
      EC肉湯44攝氏度,24h   EC肉湯產氣管為陽性(糞大腸菌群)
       
      陽性管再培養24h
       
      EMB平板分離
       
      37攝氏度,24h黑色菌落移種營養瓊脂斜面
       
      LST肉湯  IMViC生化試驗革蘭氏染色
       
      產酸產氣 ++--/-+--  無芽胞G-桿菌
       
      大腸桿菌
       
      說明:
       
      由于大部分致瀉性大腸桿菌在6攝氏度條件中可失去活力,故大腸桿菌的定性檢測比定量檢測更適宜.如果確有大腸桿菌定量檢測要求的話,可用MPN法或終點稀釋法進行.
       
      基層單位如有大腸桿菌生化鑒定要求或大腸桿菌血清學分型要求,可委托屬地出入境檢驗檢疫局進行檢驗.
       
      檢測大腸桿菌的MUG法和膜過濾法,可參閱有關標準說明進行.
       
      國標法與FDA方法,在所用培養基、檢驗程序上略有差異,但不影響大腸桿菌檢驗結果的準確性.
       
      更多資料搜索:日水生物培養基
       
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