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      微生物實驗室常見20種培養基配方

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

      微生物培養基的配方


      微生物實驗室常見20種培養基配方
       
      成分:
      牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化鈉 3克,磷酸氫二鈉  2克,0.2%滇麝香草酚藍溶液 12毫升,蒸餾水 1000毫升,PH 7.4
      制法
      1. 葡萄糖發酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。
      2. 其他各種糖發酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶1000 毫升,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌。將5毫升糖溶液加入于100 毫升培養基內,以無菌操作分裝小試管。
      注:
      蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應采用過濾法除菌。
       
      試驗方法:
      從瓊脂斜面上挑取小量培養物接種,于36攝氏度±1攝氏度培養,一般觀察2~3d。遲緩反應需觀察14~30d。
       
      成分:
      蛋白胨 20克,豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸餾水 1000毫升
      制法:將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10 毫升,并放入一個小倒管,115攝氏度高壓滅菌15分鐘。
      注:
      雙料乳糖膽鹽發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。
       
       三、5%乳糖發酵管
      成分:
      蛋白胨 0.2克,氯化鈉 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚藍水溶液 1.2毫升,蒸餾水 100毫升,pH 7.4
      制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50毫升蒸餾水內,校正pH。將乳糖溶解于另外50毫升蒸餾水內,分別滅菌121 攝氏度 15分鐘,將兩液混合,以無菌操作分裝于滅菌小試管內。
      注:
      在此培養基內,大部分乳糖遲緩發酵的細菌可于ld內發酵。
       
       
      四、緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗用)
      成分:
      磷酸氫二鉀 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸餾水 1000毫升
      制法:溶化后校正pH,分裝試管,每管1毫升 ,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。
      甲基紅(MR)試驗:自瓊脂斜面挑取少量培養物接種本培養基中,于36±1攝氏度培養2~5d,哈夫尼亞菌則應在22~25攝氏度培養。滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結果。鮮紅色為陽性,黃色為陰性,甲基紅試劑配法:10毫克甲基紅溶于30毫升95%乙醇中,然后加入20 毫升蒸餾水。
      V-P試驗:用瓊脂培養物接種本培養基中,于36±1攝氏度培養2~4d。哈夫尼亞菌則應在22~25攝氏度培養。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40%氫氧化鉀溶液0.2毫升充分振搖試管,觀察結果陽性反應立刻或于數分鐘內出現紅色,如為陰性,應放在36±1攝氏度下培養4h再進行觀察。
       
      五、營養明膠
      成分:
      蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明膠 120克,蒸餾水 1000毫升,pH 6.8~7.0
      制法:加熱溶解,校正至pH7.4~7.6,分裝小管,121攝氏度高壓滅菌10分鐘,取出后迅速冷卻,使其凝固,復查最終pH應為6.8~7.0。
      試驗方法:
      用瓊脂培養物穿刺接種,放在22~25攝氏度培養,每天觀察結果,記錄液化時間。或放在36士1攝氏度培養,每天取出,放冰箱內30分鐘后再觀察結果。
       
      六、苯丙氨酸培養基
      成分:
      酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1克)2克,磷酸氫二鈉 1克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000毫升
      制法:加熱溶解后分裝試管,121攝氏度高壓滅菌15分鐘,使成斜面。
      試驗方法:
      自瓊脂斜面上挑取大量培養物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36士1攝氏度培養4h或18~24h,滴加10%三氯化鐵溶液2~3滴,自斜面培養物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。
       
      七、蛋白胨水(靛基質試驗用)
      成分:
      蛋白胨(或胰蛋白胨)20克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4
      制法:按上述成分配制,分裝小試管,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。
      靛基質試劑
      柯凡克試劑:將5克對二甲氨基苯甲醛溶解于75毫升戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸25毫升。
      歐-波試劑:將1克對二甲氨基苯甲醛溶解于95毫升95%乙醇內,然后緩慢加入濃鹽酸20 毫升。試驗方法:挑取小量培養物接種,在36士1攝氏度培養1~2d,必要時可培養4~5d。加入柯凡克試劑約0.5毫升,輕搖試管,陽性者于試劑層呈深紅色;或加入歐-波試劑約0.5 毫升,沿管壁流下,覆蓋于培養液表面,陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。
      注:
      蛋白胨中應含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后,應先用已知菌種鑒定后方可使用。
       
      八、硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗用)
      成分:
      牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000 毫升
      制法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115攝氏度高壓滅菌15分鐘,取出直立候其凝固。
      試驗方法:
      挑取瓊脂培養物,沿管壁穿刺,于36士1攝氏度培養1~2d,觀察結果。產硫化氫者使培養基變為黑色。
      注:
      腸桿菌科細菌測定硫化氫的產生,應采用三糖鐵瓊脂或本培養基。
       
       九、尿素瓊脂
      成分:
      蛋白胨 1克,氯化鈉5克葡萄糖1克,磷酸二氫鉀 2克,4%酚紅溶液 3 毫升,瓊脂 20克,蒸餾水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升
      制法:將除尿素和瓊脂以外的成分配好,并校正pH,加入瓊脂,加熱溶化并分裝燒瓶。121攝氏度高壓滅菌15分鐘。冷至50~55攝氏度,加入經除菌過濾的尿素溶液,尿素的最終濃度為2%,最終pH應為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內,放成斜面備用。
      試驗方法:
      挑取瓊脂培養物接種,在36士1攝氏度培養24h,觀察結果。尿素酶陽性者由于產堿而使培養基變為紅色。
       
      成分:
      蛋白胨10克,氯化鈉 5克,磷酸二氫鉀 0.225克,磷酸氫二鈉 5.64克,蒸餾水 1000 毫升,0.5%氰化鉀溶液 20 毫升,pH 7.6
      制法:將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。放在冰箱內使其充分冷卻。每100 毫升培養基加入0.5%氰化鉀溶液2.0毫升(最后濃度為1:10000),分裝于12mm*100mm滅菌試管,每管約4毫升,立刻用滅菌橡皮塞塞緊,放在4攝氏度冰箱內,至少可保存兩個月。同時,將不加氰化鉀的培養基作為對照培養基,分裝試管備用。
       
      十一、營養瓊脂
      成分:
      蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15~20克,蒸餾水1000毫升
      制法:將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內,加入15%氫氧化鈉溶液約2毫升,校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂,加熱煮沸,使瓊脂溶化分裝燒瓶,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。
      注:
      此培養基可供一般細菌培養之用,可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數,瓊脂量為1.5%;如作成平板或斜面,則應為2%。
       
       十二、營養肉湯
      成分:
      蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4
      制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225 毫升 ,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。
       
      十三、緩沖蛋白胨水(BP)
      成分:
      蛋白胨 10克,氯化鈉 5克,磷酸氫二鈉 9克,磷酸二氫鉀 1.5克,蒸餾水1000毫升,pH 7.2
      制法:按上述成分配好后以大燒瓶裝,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。臨用時無菌分裝每瓶225毫升。
      注:本培養基供沙門氏菌前增菌用。
      注:
      本培養基供沙門氏菌前增菌用。
       
      十四、EC肉湯
      成分:
      胰蛋白胨 20克,3號膽鹽(或混合膽鹽)1.5克,乳糖 5克,磷酸氫二鉀 4克,磷酸二氫鉀 1.5克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升
      制法:將上述成分混合,溶解后,分裝有發酵倒管的試管中,121攝氏度高壓滅菌15分鐘。最終pH為6.9±0.2。
       
      十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)
      基礎培養基
      多胨或眎胨 5克,膽鹽 1克,碳酸鈣 10克,硫代硫酸鈉 3克,蒸餾水 1000毫升,碘溶液 碘 6克,碘化鉀 5克,蒸餾水 20 毫升
      制法:將基礎培養基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100毫升。分裝時應隨時振搖,使其中的碳酸鈣混勻,121攝氏度高壓滅菌15分鐘備用。臨用時每100毫升基礎培養基中加入碘溶液2毫升,,0.1%煌綠溶液1毫升。
       
      十六、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)
      成分:
      蛋白胨 5克,乳糖 4克,亞硒酸氫鈉 4克,磷酸氫二鈉 5.5克,磷酸二氫鉀 4.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸餾水 1000毫升
      1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1克或(DL-胱氨酸0.2克),加1mol/L氫氧化鈉1.5毫升,使溶解,再加入蒸餾水8.5毫升即成。
      制法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸餾水中,加熱煮沸,候冷備用。另將亞硒酸氫鈉溶解于100毫升蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1毫升。
      分裝于滅菌瓶中.每瓶100毫升,pH應為7.0±0.1。
       
      成分:
      蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亞鐵 0.3克,磷酸氫二鈉 4克,煌綠 0.025克,檸檬酸鉍銨 2克,亞硫酸鈉 6克,瓊脂 18~20克,蒸餾水 1000毫升,pH 7.5
      制法:
      1.將前面5種成分溶解于300毫升蒸餾水中。
      2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50毫升蒸餾水溶解。
      3將瓊脂于600毫升蒸餾水中煮沸溶解,冷至80攝氏度。
      4將以上三液合并,補充蒸餾水至1000毫升,校正pH,加0.5%煌綠水溶液5毫升,搖勻,冷至50~55攝氏度,傾注平皿。
      注:
      此培養基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱,以免降低其選擇性。應在臨用前一天制備,貯存于室溫暗處,超過48h不宜使用。
       
      成分:
      蛋白胨 20克,牛肉膏 5克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵銨 0.2克,硫代硫酸鈉 0.2克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH 7.4 
      制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升,搖勻,分裝試管。裝量宜多些,以便得到較高的底層。121攝氏度高壓滅菌15分鐘,放置高層斜面備用。
       
      十九、三糖鐵瓊脂換用方法
      成分:
      蛋白胨15克,眎胨5克,牛肉膏 3克,酵母膏 3克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH7.4
      制法:將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,加熱煮沸,以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升,搖勻,分裝試管,裝量宜多些,以便得到較高的底層。121攝氏度高壓滅菌15分鐘,放置高層斜面備用。
       
      成分:
      蛋白胨2克,氯化鈉 按不同量加,蒸餾水100 毫升,pH7.7
      制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100毫升。每瓶分別加入不同量的氯化鈉:(1)不加;(2)3克;(3)7克;(4)9克;(5)11克。待溶解后分裝試管,121攝氏度高壓滅菌15分鐘
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