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      單克隆菌落的定義和篩選

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:

      做培養基好的廠家


      單克隆菌落的定義和篩選
       
      單個細菌在固體培養基上繁殖后,會形成一個肉眼可見的子代(子細胞)群體,這個群體就是單克隆菌落。它包含有很多個細菌,并且是同一個細菌的后代。
       
      挑選單克隆菌落時注意哪些事項?
      選單克隆時可以選取邊緣顆粒較大的菌落。 菌落通常很密集很小,很難挑選單克隆。準備好無抗生素LB液體培養基,抗生素 ,7ml (非4ml)管。在做轉化試驗或者是涂平板時,必需從長出的菌中挑取單菌落。
      單菌落是由一個菌體分裂產生的,菌落內的所有菌體幾乎一樣,都包含有轉化進去的目標質粒,所以才能在平板篩選壓力下生長。假如在操作過程中混雜入污染的雜菌或者轉化入其他質粒(比如使用的器材污染等)也可能會在平板上意外生長,若將其和期望的重組子一起挑出來的話,最后將得不到質粒或者得到的質粒是不純的,所以這也是抽出來的質粒還要鑒定的原因。
       
      理論上單克隆菌落應該是基因型,或者菌株有些特別,易突變。菌株之間有粘連,劃線可能沒有得到單克隆。可以試試取一點菌液,用培養基稀釋,吹打,再涂板試一下。盡可能的讓菌長得少一些。如何獲得真正意義上的單克隆菌落?用接種環在平板上劃一下(不要管是不是單菌落),然后洗到培養基里面,加抗生素重新涂平板,然后再挑單菌落,效果不錯,切記接種環劃得菌不宜太多,點到為止。
      篩選出來的菌落不可能是百分百純的,所以分別挑單克隆然后再鑒定。而且在搖菌的過程中需要保種。鑒定無誤的話,保種的就可以用于以后的擴增。
      有時候因為人為操作失誤,也會導致挑的不是單菌落。一般我們用酶切進行驗證質粒。如果不是單菌落的話,酶切圖譜上可以很容易就看出來的。這個時候你需要把原來保存的挑菌發酵的菌種重新劃單菌落去進行純化。
      來自:qdrishui
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