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      麥芽低聚糖微生物生長的實驗研究及應用

      發布時間:

      2022-12-27

      作者:


      摘要目的:研究麥芽低聚糖是否可作為蔗糖的代用品用于糖漿劑。方法:培養基靈敏度檢查法,分別用麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖作碳源,代替需氣茵、厭氣茵、霉菌培養基中的葡萄糖配制培養基,按比濁法制備不同數量級的試驗茵,接種到各培養基中進行培養,以觀察各試驗茵在不同碳源培養基中的生長差異。結論:麥芽低聚糖與蔗糖較之葡萄糖在培養基中不易被藤黃微球菌、生孢梭茵、白色念珠菌所利用,麥芽低聚糖與蔗糖相似。
       
      關鍵詞麥芽低聚糖蔗糖、葡萄糖培養基靈敏度檢查法
       
      麥芽低聚糖通常是2~10個單糖以糖苷鍵結合的混合物,是淀粉糖中一種具有保健功能的新糖源。由于麥芽低聚糖具有易消化吸收、甜味溫和、口感好、食后不易發生齲齒等優點剖,已成為理想的食品添加劑,在國內外廣泛應用。它是否可作為蔗糖的代用品,其很重要的一點取決于麥芽低聚糖本身被微生物利用的情況,為此設計了如下微生物生長的實驗。
      1儀器與材料
      1.1儀器:pHs一3c型酸度計(上海雷磁儀器廠),隔水式電熱恒溫培養箱(上海躍進醫療器械廠),79D3型霉菌培養隔水式恒溫箱(鎮江地區醫療器械廠),JCZ一Ⅲ凈化工作臺(蘇州長橋凈化設備廠),H—1微型混合器(上海青浦徐新生化儀器廠。
      1.2材料:酪胨(胰酶水解)(北京),蛋白胨、酵母浸出粉(上海試劑供應研究中心),1一胱氨酸、硫乙醇酸鈉(上海衛輝化學試劑廠),硫酸鎂、氯化鈉、磷酸氫二鉀、葡萄糖、蔗糖(A.R),瓊脂(上海試劑二廠),麥芽低聚糖(揚州五一集團藥用輔料廠,批號970411),藤黃微球菌(28001)、生孢梭菌(64941)、白色念珠菌(98001)(揚州市藥品檢驗所),菌液均按《中國藥典M995版二部附錄制備。
      1.3其它:中國細菌濁度標準(中國藥品生物制品檢定所,批號97一1,失效期98.6),需氣菌厭氣菌培養基、霉菌培養基按中國藥典1995版二部附錄配制。
       
      2方法
      培養基靈敏度檢查法。分別用麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖作碳源,代替需氣菌厭氣菌、霉菌培養基中的葡萄糖配制培養基,用比濁法制備不同數量級的試驗菌,分別接種到各培養基中進行培養,以觀察各試驗菌在不同碳源培養基中的生長差異。全部實驗于1997年10月~1998年2月在本院藥檢室進行,實驗均在凈化臺開啟30rain后操作(菌落數平均小于1個);所用器皿以180℃干熱滅菌2h;培養基配制滅菌后經30~35℃、24h培養,證實無菌生長,方可使用;菌液稀釋時在渦輪式混合器上混合時間大于2rain。
      2.1已知濃度試驗菌的制備:分別取藤黃微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌的濃菌液各0.1~0.2ML,用滅菌0.9oA氯化鈉溶液稀釋后.放入三支空比濁管中與細菌濁度標準管比較成相同濁度,查參考菌數表,其標準菌液含菌量分別為2500萬/ML、1億/ML、450萬/ML。為了便于計算,將底數調整為10的倍數,依次取標準菌液
      2ML、1ML、2ML,分別加滅菌氯化鈉溶液3ML、9ML、7ML,混勻,即得藤黃微球菌1:10相當于1000萬/ML,生孢梭菌1:10相當于1000萬/ML,白色念珠菌1:10相當于100萬/ML,然后依次作10倍稀釋并平板計數,以復核試驗菌的含菌量。
      2.2接種與培養:將稀釋后含有不同數量級的藤黃微球菌1:10~10、生孢梭菌1:10~10、白色念珠菌1:10。~10各1ML.分別接種至9ML含麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖的需氣菌厭氣菌培養基、霉菌培養基中,每個稀釋度接種3管,以未接種的培養基作對照,細菌試驗管置30~35℃培養3天,霉菌試驗管置2O~
      25℃培養5天,觀察各試驗菌在含不同碳源的培養基中的生長差異。以接種培養基管數的2/3以上呈現的最高稀釋度為該培養基的靈敏度(且接種菌數應小于10個),三次試驗中以兩次達到的最高靈敏度為判定標準。
       
      表1各試驗菌在含不同碳源的培養基中生長情況表(n一6)
      各試驗菌在含不同碳源的培養基中生長情況表圖
      4結論
      含葡萄糖的需氣菌厭氣菌培養基靈敏度為藤黃微球菌1:10、生孢梭菌1:10,霉菌培養基靈敏度為白色念珠菌1:10.均符合藥典規定;而含麥芽低聚糖、蔗糖的需氣菌厭氣菌培養基、霉菌培養基靈敏度均不符合規定。由此可知,麥芽低聚糖與蔗糖較之葡萄糖不易被微生物生長利用。
      5討論
      5.1糖類是微生物生長最常利用的碳源,麥芽低聚糖、蔗糖它們的分子量均較大,不能直接進入細菌細胞,必須被細菌胞外酶水解為單糖(葡萄糖或果糖),才能被微生物生長所利用,而自然界中大多數細菌都能利用葡萄糖。
      5.2選擇培養基靈敏度檢查法作本實驗方法,目的是通過量化實驗條件,即加入的微生物可計數,使結果重現性好.有說服力;選擇藤黃微球菌、生孢梭菌、白色念珠菌作微生物生長實驗,使結果具有代表性;培養基除碳源外,在其它條件完全一致的情況下比較麥芽低聚糖、蔗糖、葡萄糖三種碳源被微生物生長利用的難易程度,使結果更加可靠。
      5.2.1為確保結果可靠.重現性好,避免生物差異尤其重要,要求每次所用試驗菌種的培養溫度和時間相同,稀釋后的菌液與標準管比較濁度一致。
      5.2.2液體培養基可因溶解氧而不利于厭氧菌生長,培養基在使用前應進行還原處理(煮沸驅氧);厭氧培養時沿液面緩緩加入菌液,避免用力振搖,以免過多的氧溶解于培養基中。固體培養基可因在大氣中放置而被氧化,培養基表面Eh上升,對厭氧菌生長不利。生孢梭菌在瓊脂平板上不易形成菌落,只形成凹形,本實驗平板計數以凹形計數,供參考。
       
      南京鐵道醫學院附屬揚州市第一人民醫院
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